[主題] [分享]RT-nPCR檢測貓冠狀病毒

RT-nPCR是Reverse transcriptase nested polymerase chain reaction 之簡稱...
是一個非常敏感且很實用的分子生物學技術.
PCR原理是先以高熱將雙股DNA變性.讓特異性的引子煉合至模板上再以聚合酶進行延展做出另一個互補模板...此動作反覆許多次...如此一來可以得大約n X 2的35次方以上的模板(視PCR cycles而定.n指檢體中所含之DNA).
所以檢體之中一旦有模板存在(即可被特異性引子煉合上之DNA)..就可以藉此進行DNA量的放大...最後進行染色.在UV下觀察是否有預期的片段出現來判定檢體是否為陽性...
目前以RT-nPCR技術檢測貓冠狀病毒亦是如此(因為冠狀病毒為一RNA病毒所以須先進行RT動作)...
如果檢體中所含病毒量較多則可以看到很明顯的片段...
但如果少量病毒時..可透過nested PCR技術再進行第二次放大動作...
如此一來少量的病毒可以經由二次的PCR放大而被檢測出來...
但是此技術還是有最低檢測量的限制...
所以如果PCR的"引子夠具特異性"..."操作人員技術夠純熟".
檢測出陽性結果就是陽性.陰性的話也有可能是因為病毒量太少而檢測不出來..
(但這種情況經多次採樣檢測有可能會檢測到病毒)...
另外...PCR檢測的結果只能反應出動物"當時"採樣的狀況...
(所以採集檢體的人員也是很重要的)這次檢測為陽性並不是表示下次檢測就一定會陽性..
反之這次檢測為陰性並不表示下次的檢測就一定是陰性.
在臨床上有時會見到血液檢測出貓冠狀病毒(健康貓隻喔)..
但隔一星期檢測卻變陰性(這表示第一次檢測時剛好有病毒血症.而第二次檢測時病毒血症已消失)..
另外也常見到第一次糞便檢測陰性..一個月後檢測卻為陽性...
這有可能是因為第一次檢測時病毒量不夠多..
也有可能是在這一個月中貓感染了貓冠狀病毒..
另外也有可能是貓隻早就感染了只是第一次採樣時並沒有在排毒..所以是陰性...
以上這些都是臨床上常出現的可能性...等等......
最後...PCR技術雖然敏感且實用...
但重點還是要有夠具特異性的引子及技術夠純熟的操作人員...